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液相色譜儀HPLC C18色譜柱的日常保養與維修
更新時間:2017-05-05   點擊次數:2634次

1. C18色譜柱的日常使用與保養

  在日常分離分析工作中,色譜柱使用是否得當,直接影響色譜柱的壽命。下面介紹C18柱在日常使用過程中應注意的事項。
  (1)柱子在裝卸、更換時,動作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動,以免柱床產生空隙。(2)如果儀器用來做常規分析,樣品種類有限,但分析次數多,則不妨為每一類常規分析配置1根柱,這樣有助于延長柱子的壽命。(3)如使用柱溫控制裝置時,應注意在通入流動相后才能升溫。(4)流動相使用前需進行脫氣處理,以免降低柱效和影響檢測等。樣品溶液需經適當的前處理及過濾,以減少柱污染和堵塞。(5)在更換流動相種類時,應注意溶劑的互溶性,防止發生鹽析現象。(6)柱子的實際操作壓力應低于填裝時的zui高壓力,在zui高壓力一半以下。一般不超過20 593.965~29 419.95 kPa。在低壓力(
14 709.975 kPa)的范圍使用,可使柱保持長時期的高柱效。(7)C18色譜柱屬非極性鍵合相色譜柱,流動相的pH值應嚴格控制在2~7之間,以免損壞柱子。(8)在完成分離分析工作之后,不應立即停機,需及時對色譜分析系統進行沖洗,一般0.5 h以上,以除去色譜柱內的雜質。(9)如果流動相中有鹽類,先用水充分清洗。如果是胺類(如*胺類或四丁基胺類)添加到流動相中,要用50%甲醇和0.05%磷酸溶液混合溶劑沖洗,不要只用水沖洗。(10)C18一般用100%甲醇作為保存溶劑,以防柱子干裂而損壞。嚴禁水或緩沖溶液長時間在色譜流路中保留。(11)選用合適的C18保護柱,以保護分析柱免受雜質顆粒及不可逆吸附的干擾物的影響。保護柱內裝填料顆粒度應與分析柱填料的顆粒度盡量一致。(12)柱的保存期不宜太長。短期不用的C18柱,用甲醇沖洗30~60 min,然后將柱兩端密封。較長期不用的柱子,一是采取定期沖洗,再密封的方法;二是在沖洗后,柱兩端各裝1只有一定容量的灌滿甲醇的容器(只裝一端也可),以補充在較長存放期間柱內溶劑的蒸發。

2. C18色譜柱的維修

  色譜柱在日常使用過程中,盡管保護嚴格,樣品和流動相盡管經過前處理,但經過長時間的使用,仍然難以*避免柱子受到污染,固定相流失、板結、柱床塌陷以及柱效下降等。有些可以通過維修,使部分柱效恢復。

2.1 柱污染再生技術 色譜柱污染后,可以用合適的溶劑沖洗,使柱效再生。C18柱常規的再生洗滌方法是:分別用甲醇、三氯甲wan、甲醇/水各60 mL依次通過色譜柱,再用100%甲醇60 mL平衡色譜柱后封存,柱效將恢復正常。必要時,根據柱污染性質(如有機污染、鹽類污染等),采用0.05 mol/L H2SO4、0.5 mol/L H3PO4或0.1 mol/L EDTA鈉鹽沖洗,然后再用水沖洗,zui后用100%甲醇平衡色譜柱后封存。對于嚴重污染的C18柱,可采用水、甲醇、氯fang、乙烷依次沖洗后,按順序倒過來再沖洗1次,每次所用溶劑60 mL,不接檢測器,zui后用100%甲醇平衡色譜柱封存。

2.2 柱污染的修復 在柱污染再生無效或已知柱污染嚴重時,可以采用柱修補的方法解決,但柱污染深度不宜超過5 mm。方法是將特制小鏟將污染部分挖去,再用與柱填料相同的固定相與流動相混合制成漿狀,然后將漿狀固定相仔細補入被挖去的部分(盡量使后填補的固定相接近原裝的緊密程度),修平端面即可。修好的柱子如果柱頭兩端的篩板的孔徑是一致的,可將柱子顛倒過來使用一般時間,目的是借助流動相沖洗作用,恢復柱床緊密程度。

2.3 柱塌陷的修復 柱塌陷的原因很多。對于塌陷不太嚴重時,如果柱頭兩端的篩板孔徑是一致的,可將柱顛倒使用一般時間,即可恢復性能。當塌陷嚴重(5 mm左右)時,可采用柱污染的修復方法修補即可。

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