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液相色譜儀HPLC測定余甘子中單寧酸的含量
更新時間:2019-09-19   點擊次數:2392次

1 液相色譜儀HPLC測定余甘子中單寧酸的含量實驗部分

1. 1 主要儀器與藥品

HP21100 安捷倫液相色譜儀 , 包括HP1100 四元泵, 自動進樣器,VWD 檢測器和色譜工作站;UV 21800紫外可見分光光度計 ,U PW S2IV 2107 超純水器 , 色譜純甲醇、超純水, 單寧酸(A. R. 分子式C76H52O46, 分子量1701. 25) 貴州遵義市第二化工廠, 余甘子(采集于泉州惠安縣)。

1. 2 色譜條件

色譜柱為HypersilODS (4. 0×125mm , 5Lm) 色譜柱; VWD 檢測器調節檢測波長為275nm; 流動相為甲醇和水(體積比80∶20) ; 流速為0. 5mL ·m in- 1; 柱溫: 室溫; 進樣量2LL。

1. 3 樣品處理

篩選新鮮的余甘子, 清洗去核, 風干, 稱取350. 0g 果肉于攪拌機中搗碎。將搗碎的余甘子果肉用水浸提,得到350. 0mL 提取液。用0. 45Lm 濾膜過濾, 進樣2LL。

1. 4 標準溶液的制備

   于電子天平上稱取0. 0030g 單寧酸(A. R. ) , 用乙醇、水、丙酮體積比為69. 9%29. 8%0. 3% 的溶液作溶劑溶解并定容制備成濃度為30. 00Lgöm L 的單寧酸標準溶液100mL。上述標準溶液用0. 45Lm 濾膜過濾備用。進樣2LL 分析在該條件下標樣和余甘子樣品色譜圖見圖12

4.png

 

2 液相色譜儀HPLC測定余甘子中單寧酸含量的結果與討論

2. 1 色譜條件選擇

用UV 21800 紫外可見分光光度計測得單寧酸在275nm 處有強吸收, 雖然丙酮在275nm 附近也有較大吸收,但不影響單寧酸的分析定量, 故用VWD 檢測器調節檢測波長為275nm。實驗用HypersilODS 色譜柱, 改變流動相(甲醇和水) 配比, 流速, 柱溫, 結果表明流動相為甲醇和水(體積比80∶20) ; 流速為0. 5mL ·m in- 1; 柱溫: 室溫時的出峰情況為*。

2. 2 單寧酸標準溶液溶劑的選擇

水、乙醇、丙酮都可用于單寧酸的提取, 為了使本方法的使用范圍更廣, 分別實驗了以水、乙醇、丙酮不同配比的混和溶液作標液的溶劑, 實驗結果表明用乙醇、水、丙酮體積比為69. 9%、29. 8%、0. 3% 的溶液作溶劑時出峰情況為*。

2. 3 線性回歸方程、相關系數

分別配制單寧酸標準溶液120、150、180、210、240ng/m L 用0. 45Lm濾膜過濾, 進樣后得到兩種單寧酸的回歸方程, 單寧酸1: 1b1,1= 3. 61220×10- 1, b1= - 12. 62814, r= 0. 99996; 單寧酸2: =2b2, 2 = 3. 30394×10- 1, b2 = - 4. 24693, r= 0. 99998。線性范圍為120—240ng/mL。

2. 4 精密度實驗

用120ngmL 單寧酸標準溶液, 重復進樣4 次, 測定結果見表1。

5.png

2. 5 余甘子中單寧酸提取液加標回收率的測定

取已知單寧酸含量的余甘子水提液稀釋液5mL , 加入240ngm L 的單寧酸標準溶液5mL , 再用70% 乙醇稀釋定容至25mL。將以上溶液用0. 45Lm 濾膜過濾2. 2 項色譜條件進行HPLC分析測定單寧酸的回收率結果見表2

6.png

3液相色譜儀HPLC測定余甘子中單寧酸含量的結論

應用液相色譜法測定余甘子中單寧酸的含量操作簡便, 3m in 可完成單次檢測, 在120—240ng/mL 的范圍內有良好的線性關系, 相關系數達99. 996% 以上, 加標回收率在99. 7% —107. 5% 之間。本方法快速, 方便, 可靠, 可用于多種物質中單寧酸含量的測定。

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