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液相色譜儀HPLC測定豆類食品中異黃酮的含量
更新時間:2016-01-04   點擊次數:1950次

大豆異黃酮是大豆生長中形成的一類次級代謝產物。由于是從植物中提取,與雌激素有相似結構,因此稱為植物雌激素。大豆異黃酮的雌激素作用影響到激素分泌、代謝生物學活性、蛋白質合成、生長因子活性,是天然的癌癥化學預防劑。異黃酮是一種弱的植物雌激素,大豆是人類獲得異黃酮的惟一有效來源。

本文選取我國居民日常食用的主要豆制品,對其中雌激素樣活性較強的染料木素和大豆苷元以 及它們對應的糖苷進行定量檢測,從大豆異黃酮的組成和含量兩方面進行分析評估,進而了解我國豆制品中大豆異黃酮含量的基本情況,為以后全面深入的研究奠定 基礎。由于食品中大豆異黃酮的檢測尚無國家標準,因此選用較通用的液相色譜法為本研究的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

標準品;大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素;正己烷、甲醇(分析純);甲醇(色譜純)。

1.2 儀器與設備

Waters 1525液相色譜儀,系統包括515HPLC雙泵、Waters 2996光電二級管列檢測器;DZG-6050真空干燥箱;KQ-2200超聲波清洗器。

1.3 方法

1.3.1樣品制備

固體樣品10~45 g,粉碎,55℃真空干燥24h,進一步粉碎,每份稱取0.2 g;加5mL正己烷,超聲脫脂10 min,離心(3 000 r/min,3 min)。棄去正己烷;加10mL 80%甲醇,超聲萃取10min,離心(3 000 r/min,3 min),轉移上清液,通風櫥中70℃水浴揮發至干,80%甲醇復溶至0.4mL,過膜,待測。

液體樣品10 mL;加2.5 mL正己烷,超聲萃取10 min,靜置,棄去上層脂肪層。取2 mL溶液。加8 mL甲醇,超聲萃取10 min,離心(3 000 r/rain,3 min),轉移上清液,通風櫥中70℃水浴揮發至干,80%甲醇復溶至0.4 mL,過膜,待測。

1.3.2         HPLC條件

色譜柱為kromasil C18柱(4.6minx250mm,5um);流動相為甲醇(A)/水(B),梯度洗脫條件:0-15 min,30%~70%B,15~30 min。70%-30%B;流速0.6 mL/min;柱溫25℃;進樣量20uL;檢測波長254 nm。

1.3.3標準曲線的繪制

稱取4種對照品各5 mg左右,然后分別置于10 mL容量瓶中,80%甲醇溶解,定容、搖勻,配成約0.5 mg/mL貯備液。再由貯備液分別配成約2、4、8、16、32、64、128 mg/L的7個濃度梯度工作液,HPLC檢測。

2 結果與分析

2.1 方法學考察

由分離結果圖1可看出,在此色譜條件下4種化合物分離良好,保留時間合適。

2.1.1線性關系及檢出限

1.png

由表l回歸系數可看出,在2~128 mg/mL濃度范圍內。各峰線性關系良好,可用于定量分析。進樣量為20uL時,大豆苷(D)、染料木苷(G)、大豆苷元(Da)、染料木素(Ge)的zui 低檢出濃度(以S/N≥3計)分別為:0.200、0.015、0.400、0.0060ug/mL。

2.1.2重現性

每類樣品選1個樣,每個樣稱取同等質量5份。按上述方法制備后對每份樣做含量檢測,檢測結果發現每類樣品中。4種化合物含量的RSD值均≤2.58%,說明此方法重現性好,準確度高。

2.1.3精密度

每類樣品選1個樣,連續進樣6次,檢測結果發現每類樣品中,4種化合物含量的RSD值均≤2.78%,說明此方法重現性好,精密度高。

2.1.4回收率

每類樣品選1個樣,在測得已知含量的樣品溶液中,按方法學原則,在0.5~2倍之間取3個濃度0.5、l、2,加標,測3次,計算回收率。每類樣品在不同 加標倍數下,4種化合物的回收率范圍分別為D:88.30%-105.53%。G:84.92%-l 13.7%,Da:93.07%-115.76%,Ge:91.18%-107.92%。RSD范圍:1.22%-3.56%。說明此方法加標回收率較 好,準確度較高。


 

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