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液相色譜儀測定番石榴葉中游離鞣花酸
更新時間:2016-02-25   點擊次數:1788次

本實驗利用液相色譜法對番石榴葉粉中鞣花酸的含量進行測定,為更廣泛地開展番石榴葉開發利用提供理論和。

1材料與方法

1.1材料與試劑

番石榴葉片,鞣花酸標準品美國Fluka公司;甲醇(色譜純);甲醇、鹽酸(均為分析純)

1.2儀器與設備

LC-20AD液相色譜儀(SPD-20A紫外檢測器、SIL-20A自動進樣器及CTO-10A柱溫箱)日本島津公司;Universal32R高速臺式冷凍離心機德國Hettich公司;Elix5超純水儀美國Millipore公司。

1.3標準溶液的配制

準確稱取鞣花酸標準品40mg,轉移至100mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得到質量濃度均為400mg/L的混標溶液,隨后逐級稀釋至0.515102050100200mg/L

1.4色譜分析條件

色譜柱為IntersilODS-SP色譜柱(250mm×4.5mm5μm),柱溫35°C,流動相為3%冰乙酸(A)-甲醇(B),梯度洗脫程序:04minB20%升至45%,保持6min1015minB45%升至70%1520min升至100%,保持1min;進樣體積10μL

1.5樣品處理

將所摘取的新鮮番石榴葉片分老葉、嫩葉、成熟葉,于105°C烘至質量恒定,用粉碎機打成粉,分別準確稱取1.0g粉末,放入100mL單頸瓶中,加入甲醇(0.01%HCl)30mL,于70°C攪拌回流,2h后取出冷卻,用Whatman4號濾紙過濾,即得番石榴葉片粗提取液,置4°C冰箱備用。每個樣品設3次重復。

2結果與分析

2.1標準曲線的制作

取各級標準溶液,進樣10μL,所得的色譜圖疊加如圖1所示,以標樣質量濃度Y/(mg/mL)為縱坐標、標樣峰面積X/mV為橫坐標,繪制標準溶液曲線,計算線性回歸方程為Y=108711X45231,線性范圍為0.5200mg/L,相關系數為0.9998

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2.2精密度實驗

將同一番石榴葉提取液樣品(樣品代號2010.6.25)分裝于10個樣品瓶中,在同一天內重復進樣5次,測定峰面積,并計算相對標準偏差(RSD)來考查其測定的精密度,得出峰面積的RSD0.6%,保留時間的RSD0.06%。同時將該批樣品連續測定5d,得出峰面積的RSD1.13%,說明精密度良好。

2.3回收率實驗

采用加標樣回收法,稱取番石榴葉3份,每份樣量1.0g,分別加入1000μg/mL的鞣花酸標準溶液0.51mL,其他均按1.5節方法進行,平行測定3次,計算回收率(回收率為用添加標樣樣品的測出量減去樣品測出量,再除以加入的標樣量,乘以100%),結果見表3。結果表明平均回收率為95.86%98.31%

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2.4樣品分析

2.4.1色譜分離效果

按照上述色譜條件,將嫩葉、成熟葉、老葉各樣品進樣10.0μL進行液相色譜分析,所得樣品色譜圖見圖2,與標準色譜圖(1)比較,可確定峰1為鞣花酸,峰1與前后相鄰兩峰之間的分離度均大于1.5,說明該梯度洗脫方法可以成功地分離鞣花酸和其他組分。

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2.  4.2番石榴葉片中游離鞣花酸含量

從表2可看出,番石榴葉片中游離鞣花酸含量以幼嫩葉居多,成熟葉次之,而老葉中不含鞣花酸。

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3討論

番石榴葉提取物,必須采用梯度洗脫方法才能有效地分離鞣花酸和其他組分。

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